Zestaw TGuide S96 z krwi/komórek/tkanek

A-1 Niewystarczająca liza lub homogenizacja komórek

---- Zmniejsz zużycie próbki, zwiększ ilość buforu do lizy, zwiększ czas homogenizacji i lizy.

A-2 Ilość próbki jest za duża

---- Zmniejsz ilość używanej próbki lub zwiększ ilość buforu do lizy.

A-1 Niewystarczająca liza komórek lub homogenizacja

---- Zmniejsz zużycie próbki, zwiększ ilość buforu do lizy, zwiększ czas homogenizacji i lizy.

A-2 Ilość próbki jest za duża

----Proszę odnieść się do maksymalnej wydajności przetwarzania.

RNA A-3 nie jest całkowicie eluowane z kolumny

---- Po dodaniu wody wolnej od RNaz pozostaw ją na kilka minut przed odwirowaniem.

A-4 Etanol w eluencie

---- Po wypłukaniu ponownie odwiruj i usuń bufor do płukania tak bardzo, jak to możliwe.

A-5 Pożywka do hodowli komórkowej nie została całkowicie usunięta

---- Podczas zbierania komórek, upewnij się, że pożywka hodowlana została usunięta w jak największym stopniu.

A-6 Komórki przechowywane w RNAstore nie są skutecznie odwirowywane

----Gęstość magazynów RNA jest większa niż średnia pożywka do hodowli komórkowej; dlatego należy zwiększyć siłę odśrodkową. Sugeruje się wirowanie przy 3000x g.

A-7 Niska zawartość i obfitość RNA w próbce

---- Użyj pozytywnej próbki, aby określić, czy niska wydajność jest spowodowana przez próbkę.

A-1 Materiał nie jest świeży

---- Świeże tkanki należy natychmiast przechowywać w ciekłym azocie lub natychmiast umieścić w odczynniku RNAstore, aby zapewnić efekt ekstrakcji.

A-2 Ilość próbki jest za duża

---- Zmniejsz ilość próbki.

Zanieczyszczenie RNazą A-3n

----Chociaż bufor dostarczony w zestawie nie zawiera RNazy, łatwo jest zanieczyścić RNazą podczas procesu ekstrakcji i należy się z nim obchodzić ostrożnie.

A-4 Zanieczyszczenie elektroforezy

---- Wymień bufor do elektroforezy i upewnij się, że materiały eksploatacyjne i bufor ładowania są wolne od zanieczyszczenia RNazą.

A-5 Zbyt duże obciążenie do elektroforezy

---- Zmniejsz ilość obciążanej próbki, obciążenie każdego dołka nie powinno przekraczać 2 μg.

A-1 Ilość próbki jest za duża

---- Zmniejsz ilość próbki.

A-2 Niektóre próbki mają wysoką zawartość DNA i mogą być traktowane DNazą.

----Wykonaj obróbkę DNazą wolną od RNaz na otrzymany roztwór RNA, a RNA może być bezpośrednio użyty do kolejnych eksperymentów po obróbce lub może być dalej oczyszczony za pomocą zestawów do oczyszczania RNA.

Do wyrobów szklanych wypiekanych w temperaturze 150°C przez 4 godz. W przypadku pojemników plastikowych zanurzyć w 0,5 M NaOH na 10 min, a następnie dokładnie spłukać wodą wolną od RNaz, a następnie wysterylizować w celu całkowitego usunięcia RNaz. Odczynniki lub roztwory użyte w eksperymencie, zwłaszcza woda, muszą być wolne od RNaz. Do wszystkich preparatów odczynników używaj wody wolnej od RNaz (dodaj wodę do czystej szklanej butelki, dodaj DEPC do końcowego stężenia 0,1% (V/V), wytrząsaj przez noc i autoklawuj).